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Dernière mise à jour : Mai 2018

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PIC PRC

Imagerie calcique et FRET - METAFLUOR/METAMORPH

Un peu d'histoire...

Image du microscope calcique/FRET
© PIC

La mesure directe du calcium libre dans les cellules vivantes a commencé dans les années 1960 avec l'aequorine, une protéine bioluminescente sensible au calcium. Le développement d'indicateurs fluorescents de synthèse (Fura2, Indol, Fluo3, Fura, etc.), couplé aux progrès de la microscopie et du traitement informatisé des images, rend aujourd’hui possible aujourd'hui l'étude cinétique des variations du Ca+2 intracellulaire.

Le transfert d'énergie par résonance de type Förster, ou FRET (Forster Resonance Energy Transfer), est décrit pour la première fois par Foster en 1946. Les applications de cette approche à l'étude des interactions protéiques apparaîtront à la fin du XXème siècle.

Présentation du système

L’imagerie calcique est une méthode scientifique qui permet de visualiser le calcium dans la cellule ou un milieu. Différents indicateurs du calcium permettent de le révéler, car ils vont changer de "couleur" lorsqu’ils rencontrent du calcium.

Le FRET s’appuie sur le transfert d’énergie entre deux molécules fluorescentes. Ce phénomène est observable lorsque la molécule "donneur" de photons est suffisamment proche de la molécule "accepteur" (< 10 nm).

L’équipement permet :

  • Acquisition d’images de fluorescence
  • Acquisition rapide multi-marquages fluorescents
  • Imagerie calcique
  • FRET (Förster Resonance Energy Transfer)
  • Analyse d’images FRET et Calcium

Caractéristiques techniques :

  • Microscope : LEICA inversé DMIRBE
  • Objectifs : 10X 0.3 à air, 20X 0.4 à air, 40X 1 à huile, 100X 1.3 à huile.
  • Caméra sensible : CoolSNAP HQ2 (1392 X 1040 pixels, taille du pixel : 6.45µm )
  • Logiciel d’acquisition et d’analyse d’image : Metamoph/ Metafluor
  • Filtre de Fluorescence : Pilotage automatique filtres et shutter
Filtres

Filtres de fluorescence

En détail...
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